A prolactina é produzida em pequenas quantidades durante a puberdade, participando no desenvolvimento das glândulas mamárias juntamente com o estrogénio e a progesterona. Durante a gravidez e principalmente na amamentação (aleitamento materno), a produção de prolactina é muito elevada.

Após o parto, a prolactina estimula a produção de leite por parte das glândulas mamárias. A sucção do mamilo pelo bebé permite a elevada concentração de prolactina o que possibilita a continuada produção de leite. Esta diminui ou termina completamente quando a mãe deixa de amamentar, pois a falta de estímulo leva à diminuição de prolactina.