Riboflavina é uma das vitaminas com mais ampla distribuição, mas há muito poucas fontes ricas. A levedura e o fígado têm as concentrações mais elevadas, mas as fontes de dieta mais comuns são o leite e os seus derivados, a carne, os ovos e os vegetais de folhas verdes. Os grãos dos cereais, embora fontes pobres em riboflavina, são importantes para aqueles que dependem dos cereais como componente principal da dieta alimentar. Os cereais fortificados os produtos de panificação fornecem grandes quantidades. As fontes animais de riboflavina são melhor absorvidas que as fontes vegetais. No leite de vaca, ovelha e cabra, pelo menos 90 por cento da riboflavina está na forma livre; na maioria das outras fontes, surge ligado a proteínas.

A deficiência de riboflavina raramente ocorre de forma isolada, e sim normalmente em combinação com deficiências nas outras vitaminas hidrossolúveis. Pode ocorrer como resultado de um trauma, incluindo queimaduras e cirurgia e pode ser observada em doentes com doenças crónicas debilitantes, diabetes, hipertiroidismo e cirrose hepática.